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何為細胞老化？

1882年，德國生物學(xué)家Weismann曾大膽預(yù)測“在細胞水平存在老化現(xiàn)象"。他推測：機體的壽命限制受控于體細胞的分裂能力；在遺傳進化中，不同物種的體細胞獲得了不同分裂的潛能，從而決定了不同物種的壽命長短。

20世紀(jì)50年代，Swin和他的同事利用原代細胞體外培養(yǎng)試驗證明了來源于不同物種的纖維細胞均不具備無限分裂的潛能。取得突破性進展的還是Hayflflick和Moorhead，他們做了更系統(tǒng)更細致的觀察和描述，他們對25株人成纖維細胞進行原代培養(yǎng)，在這個過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過約50次傳代之后，所有細胞出現(xiàn)功能退化，并且喪失分裂能力的現(xiàn)象。此后人們將這一現(xiàn)象稱之為“Hayflflick極限"或者自發(fā)性老化。之后也有事實證明，細胞老化并不是體外培養(yǎng)所導(dǎo)致，細胞在體內(nèi)也會隨著年齡的增長，逐步走向老化。

※細胞老化最開始的現(xiàn)象通常為細胞內(nèi)部會出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現(xiàn)黑點，大多沿細胞周邊排布，內(nèi)部中間也可能會顯現(xiàn)一些，但相對周邊較少；

※老化的細胞會出現(xiàn)細胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞膜起泡，皺縮等現(xiàn)象；

※老化以后的細胞會出現(xiàn)立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規(guī)則形狀；

※細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄"，做轉(zhuǎn)染實驗時，細胞死亡率會較高，但培養(yǎng)液不會發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。（如果是細菌污染的話，一般會出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細菌；若是支原體污染的話，細胞也會失去正常形態(tài)，會有細胞的死亡）；

※細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮在培養(yǎng)液中；

※老化的細胞表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低；

※分裂的細胞數(shù)量明顯的減少，同時細胞的增殖速度也會大大下降；

細胞開始長角分化。

如何進行污染源排查？

*血清：其他試劑保持不變，僅更換血清。

*基礎(chǔ)培養(yǎng)基：其他試劑保持不變，僅更換基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

*PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS。

*胰酶：若細胞復(fù)蘇的很好，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變，更換消化用胰酶，看細胞狀態(tài)。

細胞反復(fù)復(fù)蘇都會出現(xiàn)污染，那可保持培養(yǎng)體系不變，培養(yǎng)其他類型且適用于此培養(yǎng)體系的細胞，觀察是否有污染出現(xiàn)。整個營養(yǎng)體系：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、營養(yǎng)添加物都可使用控制變量法進行排查。