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胎牛血清常見問題分析
更新時(shí)間:2022-12-26 點(diǎn)擊量:932
  一、如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?  

未拆封的血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi),再放回冷凍。


將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。溶解后建議盡快使用,若長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。


總結(jié):胎牛血清推薦在-10至-20℃條件儲(chǔ)存,并避免反復(fù)凍融。


  二、胎牛血清中絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?  
上文提到,血清在非冷凍狀態(tài)下存放時(shí),其中的多種蛋白或脂蛋白會(huì)形成肉眼可見的沉淀。如血纖蛋白(fibrin),在解凍過程中可能會(huì)發(fā)生聚集,形成肉眼可見的沉淀,當(dāng)遇到此類情況,我們可以如下應(yīng)對(duì):
◆ 將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過夜;
◇待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2-3小時(shí);
◆ 輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;
◇低速離心5分鐘,去掉沉淀。



  三、如何避免胎牛血清中產(chǎn)生沉淀?  


◆ 解凍時(shí),請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一;

◇分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡);

◆ 切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍,較大的溫差,易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀;

◇切勿將血清置于37℃過長(zhǎng)時(shí)間,否則可能使之渾濁,其中一些不穩(wěn)定的組分也會(huì)因此受到影響,最終降低血清的品質(zhì);

◆ 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟;

◇若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30分鐘的原則,并且保持搖晃均勻。溫度過高、時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。


  四、胎牛血清中的“黑膠蟲"是怎么回事?  


在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候,有時(shí)會(huì)在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動(dòng),小黑點(diǎn)有時(shí)呈點(diǎn)狀,有時(shí)呈小的片狀,運(yùn)動(dòng)形式為在原地振動(dòng),類似布朗運(yùn)動(dòng),這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌,也不是支原體,目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲"。


黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭(zhēng)議。黑膠蟲一般是存在血清里的,而血清通常是經(jīng)過0.1μm濾膜過濾的,所以血清里不可能存在細(xì)菌、霉菌及支原體等微生物。如果說黑膠蟲不是生物,它會(huì)不斷增多,達(dá)到一定數(shù)量時(shí)會(huì)與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng),從而使得細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足而死亡。



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